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抗体药工艺中的第一支纯化柱,使用Protein A亲和柱一定是最好的吗?

版权所有,转载请联系基因市场部
2020-03-20

Q: 如何通过保护Protein A亲和纯化树脂来提高整体纯化工艺经济效益?

A:Enhanced Capture Process(ECP),在Protein A亲和层析前加入耐高盐离子交换层析作为预处理。

在诸如癌症和类风湿性关节炎之类的困难疾病治疗中,单克隆抗体(mAb)通常被认为是安全有效的,所以单抗药物的市场不断增长。随着市场需求的不断增长,企业之间竞争的不断加剧,伴随而来的带给单抗药物生产商们更多的是改善运营的压力。面对压力,不断寻求纯化工艺的创新策略,以及筛选更有效的纯化树脂始终被重视。Bio-Works致力于纯化填料的生产,不仅仅提供更高效的纯化树脂,更是在抗体纯化工艺中提出了独到的优化策略,可帮助单抗生产改善纯化工艺,同时在生产中实现成本效益。


传统的抗体工艺纯化过程

传统的抗体纯化经典三步骤是(CEP):(i) 目标产物的浓缩和有害杂质的去除(Capture), (ii) 进一步去除大量杂质(Enhance), (iii) 最后,去除剩余的痕量杂质和不需要的目标产物结构变体,例如多聚体(Polish)。
由此可见,这种广泛使用的传统方法将Protein A亲和柱暴露在了大量生物负荷的第一线。为了在经济上可行,Protein A亲和柱必须循环使用上百次,尽管它们对NaOH的原位清洗(CIP)程序很敏感,而且即使使用苛刻的CIP方法,实际上也无法去除某些污垢成分。而提高Protein A亲和柱的性能和树脂寿命已成为下游工艺研发的重点。因此,我们能否保护这一关键组件免受损害,而又维持甚至提高整个工艺效率和经济性?或许,确实有一种方法能够使杂质(HCP包括蛋白酶和HCD)早日快速去除,进而延长Protein A亲和柱的使用寿命,或者使其免受苛刻的CIP清洗。那么,如何通过保护Protein A亲和纯化树脂来提高整体纯化工艺经济效益?


优化的抗体纯化策略——ECP 策略

Enhanced Capture Process(ECP)策略是指在使用高选择性的捕获步骤之前,首先去除原料中潜在的有害成分,然后再进行捕获和后续的精制,对产品纯度的提高和工艺性能都有明显的助益。这种方法的有效性已经得到证明。例如,如上所述在纯化抗体时,在Protein A亲和层析的上游使用耐高盐阴离子交换树脂WorkBeads™40 TREN预保护层析,用以保护Protein A柱免受大量杂质的生物负荷,并降低对严苛CIP清洗的需要。


当您的第一支纯化柱是WorkBeads™40TREN。。。。。。

WorkBeads™40TREN耐高盐阴离子交换层析(IEX)树脂,在低于pH9环境中带正电荷,已被证明可有效去除染色质复合物,内毒素和宿主细胞蛋白质等。而大多数抗体在中性或低pH下带正电荷,在该pH区间内不会与WorkBeads™40 TREN结合。因此可以让接下来的Protein A 亲和柱免受杂质累积,且在减少了其他分子的干扰下,能发挥最大的纯化效能,提高最终的单抗纯度。另外该树脂与普通离子交换层析树脂不同,其耐高盐的特性,允许发酵液不需要经过稀释就可以使用WorkBeads™ 40 TREN进行杂质的预处理。


预先去除宿主残留蛋白质(HCPs)和DNA(HCD),保护Protein A亲和柱免受大量的生物负荷累积,延长Protein A亲和柱的使用时间,降低最终产品的销售成本(COGS);


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可一定程度上提升Protein A亲和柱的动态结合载量(10% - 20%);



标准化进入到Protein A亲和柱的样本状态,而无需考虑细胞培养状态,细胞死亡程度和宿主蛋白/DNA的残留量,提高纯化工艺结果的重复性;



非常快速的去除宿主细胞中的蛋白酶,除可以保护单抗外,还可降低对其对Protein A的水解,减少Protein A配体的泄露



更加容易实现分批上样,从而可使用更小体积的Protein A亲和柱。


WorkBeads™ affimAb专为超纯mAb纯化而设计

单抗药物经常需要重复的高剂量给药,且药物相关的杂质与剂量相关,即使是微量杂质也可能导致很大的累积效应,因此单抗药物治疗对纯度要求非常严格。Bio-Works品牌其琼脂糖纯化树脂WorkBeads™不同于以往的产品,被称为“新一代纯化树脂”,可以实现比市场上常规树脂更高的纯化纯度。这类树脂的典型特征是它们由具有高孔隙率的小琼脂糖珠组成,由特殊的交联生产方法,因此即使在高流速下也非常稳定。
WorkBeads™ affimAb无论在对单抗的动态结合载量(dynamic binding capacity,DBC)、选择性(selectivity)、Protein A 配体泄露,NaOH清洗的耐受性等方面,都有卓越的数据表现;WorkBeads™ affimAb所提供的是载量和选择性之间的最佳平衡(optimal balance between capacity and selectivity)。简而言之,Bio-Works的纯化树脂可以改善您的mAb纯化工艺,同时帮助您提高生产成本效益。

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