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Odyssey In-Cell Western技术---美国药典官方推荐胰岛素生物活性检测方法

版权所有,转载请联系基因市场部
2020-10-10

美国药典官方推荐


自胰岛素作为治疗药物以来,检测胰岛素及胰岛素类似物的生物活性常用和标准方法是基于动物水平的兔血糖测定法,但这种方法相对而言过程更复杂,更耗时,花费更大。为解决以上问题,美国胰岛素药典官方推荐了另一种检测方法---Odyssey In-Cell Western技术 ,这种方法灵敏度更高,结果更精确,通量更高,重复性更好





美国药典为什么推荐Odyssey In-Cell Western技术进行胰岛素及胰岛素生物活性检测?






Odyssey In-Cell Western技术是LI-COR公司研发的一种基于细胞水平的Western 检测方法,可直接检测完整细胞的hIR(人胰岛素受体)的自身磷酸化水平,传统检测方法相比具有以下优点:


01
灵敏度更高

药典通过32个月,使用多个浓度差异较小(55%,70%,85%,100%,143%,170)的胰岛素样品进行In-Cell Western检测,结果表现出较高灵敏度。


02
结果更精确


人胰岛素受体激活的剂量依赖性结果。

A:Odyssey双色红外激光成像系统检测In-Cell Western结果(700nm细胞数目均一化结果,800nm hIR自身磷酸化结果)

B:4-PL回归分析计算胰岛素标准品和胰岛素样品三次重复的EC50值。


03
重复性更好

In-Cell Western :CV:15%

传统体内兔血糖方法:CV:22%

更详细结果详见附件参考文献!

04
更符合3Rs原则

从伦理角度看,In-Cell Western更好,更符合许多国家倡导的3R原则(减少和改进、替换基于动物的检测)


05
通量更高

用96孔或384孔进行检测,通量更高




In-Cell Western 技术流程

在Odyssey双色红外激光成像系统上利用 In-Cell Western 技术进行胰岛素及胰岛素类似物生物活性检测,被视为目前兔血糖检测非常好的替代方法,更是美国胰岛素官方推荐的方法。




In-Cell Western检测技术是LI-COR公司研发的一种直接在微孔板中对细胞内目标蛋白进行定量免疫荧光检测的方法。In-Cell Western检测技术无需进行裂解细胞、制胶、电泳、转膜等步骤,不仅节省了大量时间,而且大大提升了实验通量和重复性,为广大科研和企业客户进行高通量筛选提供了非常大的便利。LI-COR在近红外荧光成像域近30年丰富经验和先进技术继续开发引领全球的技术和产品,提供近红外荧光Western Blot成像完整解决方案,助您解决实验过程中的问题,获得高质量、符合期刊杂志发表要求的Western Blot数据





一直被模仿,从未被超越!



基因有限公司作为LI-COR近红外成像解决方案的合作伙伴与中国区代理商,与LI-COR一起邀请您一同关注近红外荧光成像技术在Western Blot准确定量、磷酸化等蛋白修饰化研究、In-Cell Western、双色EMSA、蛋白芯片及光免疫疗法等方面的应用进展。欲进一步了解详细内容,请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司工作人员





参考文献:

(1)43(4) Stimuli to the Revision Process: A Proposed In Vitro Insulin Cell-Based Bioassay to be I... http://www.usppf.com/pf/pub/data/v434/GEN_STIMULI_434_s201864.html#GEN_STIMULI.

(2)43(4) In-Process Revision: <121> Insulin Assays http://www.usppf.com/pf/pub/data/v434/CHA_IPR_434_c121.html#CHA_IPR_434_c121


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